گزارش آزمون تب زایی به روش LAL محیط کشت جنینG1 (دانلود)
اطلاعات کلی
کاربرد: کشت جنین انسان از مرحله زایگوت تا کلیواژ (روز سوم) و یا انتقال جنین در مرحله کلیواژ به رحم
شرایط و مدت زمان نگهداری: در دمای یخچال (℃ 2-8) و به دور از تابش نور نگهداری شود. این محصول تا 10 هفته پس از تاریخ تولید (در صورت باز نشدن بسته بندی استریل) قابل استفاده است.
ملاحظات دفع پسماند: باید طبق دستورالعمل دفع پسماندهای آزمایشگاهی صورت گیرد.
ترکیبات: این محصول حاوی بافر بیکربنات، گلوکز، لاکتات، پیرووات و تمامی اسیدهای آمینه مورد نیاز برای حمایت از رشد و تکوین جنین انسان در شرایط آزمایشگاهی می‌باشد.
روش استفاده
کارایی پروتکل زیر برای کشت جنین انسان از مرحله زایگوت تا کلیواژ و یا انتقال جنین در مرحله کلیواژ به رحم نشان داده شده است و این پروتکل صرفاً به عنوان یک مثال ارائه می‌گردد:
1- در حدود 12-8 ساعت پیش از استفاده، میزان مورد نیاز از محیط کشت باید با میزان % 10 (حجمی-حجمی) از آلبومین سرم انسان یا HSA (Human Serum Albumin) با غلظت mg/ml 100 جهت تأمین مکمل پروتئینی مخلوط گردد. 2- حجم‌های μl 25-100 و یا بالاتر از محیط کشت در دیش‌های کشت قطره‌گذاری شده و سپس توسط روغن معدنی (Mineral Oil) بطور کامل پوشانده شود. 3- پیش از قرار دادن جنین‌ها، دیش آماده شده در مرحله قبل برای مدت زمان کافی جهت حصول اطمینان از برقراری تعادل pH و دما در انکوباتورCO2 قرار داده شود. بسته به شرایط موجود، این زمان ممکن است بین 8 تا 12 ساعت متغیر باشد. در صورتیکه محیط کشت و روغن معدنی پیش از آماده‌سازی دیش‌ها در انکوباتور به تعادل رسیده باشند، مدت زمان مورد نیاز برای برقراری تعادل دیش آماده شده کوتاه‌تر خواهد بود. 4- در روز یکم تکوین جنین، زایگوت‌ها در قطرات محیط کشت قرار داده شده و تا روز سوم تکوین (مرحله 8-4 سلولی) در انکوباتور کشت داده شوند. 5- برای انتقال جنین به رحم در روز سوم تکوین (مرحله کلیواژ)، از میزان μl 20-30 از محیط کشت به تعادل رسیده استفاده گردد. 6- بلافاصله قبل از انتقال جنین، کاتتر انتقال توسط محیط کشت شستشو داده شود.
هشدارها
1- کاربر می‌بایست بطور کامل این راهنما را مطالعه کند و پیش از استفاده از محصول، آموزش‌های لازم را دریافت نماید. 2- این محصول برای تزریق به بدن، غیر قابل استفاده است. 3- از استریل کردن مجدد محصول خودداری شود. 4- در صورت مشاهده موارد زیر از استفاده از محصول خودداری گردد: - وجود آسیب در بسته‌بندی استریل - سپری شدن تاریخ انقضاء - تغییر رنگ، کدورت و یا وجود ذرات معلق یا رسوب. 5- این محصول حاوی آنتی بیوتیک جنتامایسین سولفات می‌باشد، لذا استفاده از آن در بیمارانی که نسبت به این آنتی بیوتیک حساسیت دارند باید همراه با احتیاط باشد. 6- در زمان استفاده از این محصول به منظور جلوگیری از آلودگی می‌بایست از روش‌های آسپتیک استفاده شود. 7- این محصول تا 7 روز پس از باز شدن بسته‌بندی استریل قابلیت استفاده ایمن را دارد.
نکته: در بیشتر موارد، غلظت CO2 در انکوباتور به میزان 7-5 درصد منجر به قرارگیری pH محیط کشت در بازه مورد پذیرش 4/7 - 2/7 خواهد شد. با این وجود، تنظیم دقیق غلظت CO2 برای دستیابی به pH تقریبی 3/7 (33/7 - 27/7) به عنوان pH بهینه، به چندین فاکتور از جمله ویژگی‌های فیزیکی انکوباتور و ارتفاع جغرافیایی وابسته است. در نتیجه، توصیه می‌گردد که هر آزمایشگاه غلظت CO2 مورد نیاز برای دستیابی به pH بهینه 3/7 در محیط کشت را محاسبه نماید.
