کارایی پروتکل زیر برای کیت ارزیابی شکست DNA اسپرم (SDFA) با ارزیابی وضعیت یکپارچگی مولکول DNA اسپرم و محاسبه ایندکس شکست DNA (DFI) اطلاعات با ارزشی در رابطه با وضعیت بیماران مراجعه کننده به مرکز درمان ناباروری جهت انتخاب پروتکل درمانی مناسب در اختیار پزشک معالج قرار میدهد و این پروتکل صرفاً به عنوان یک مثال ارائه میگردد:
1- قرار دادن میکروتیوب حاوی ژل در فوم تعبیه شده در کیت و غوطه ورسازی آن در بن ماری 95-85 درجه به مدت 5 دقیقه یا تا زمانیکه ژل کاملا ذوب گردد.
2- قرار دادن میکروتیوب حاوی ژل ذوب شده در دمای محیط به منظور هم دما شدن با محیط (در حدود 3-2 دقیقه)
3- اضافه کردن 50 میکرولیتر از نمونه اسپرم آماده سازی شده به میکروتیوب حاوی ژل و همگن کردن آن
4- قرار دادن 20 میکرولیتر از مخلوط فوق بر روی لام مخصوص و بلافاصله قرار دادن لامل روی آن (از ایجاد حباب پرهیز شود)
5- قرار دادن لام در یخچال 8-2 درجه سانتی گراد به مدت 4 دقیقه
6- برداشتن لامل به آهستگی از روی لام
7- قرار دادن لام در داخل پتری دیش و افزودن محلول A و نگهداری آن در تاریکی به مدت 7 دقیقه در دمای محیط
8- تخلیه آهسته محلول A و افزودن محلول B و نگهداری آن به مدت 15 دقیقه در دمای محیط
9- تخلیه آهسته محلول B و افزودن آب مقطر و نگهداری به مدت 3 دقیقه
10- تخلیه آهسته آب مقطر و افزودن اتانول 70 ،90 و 100 درصد به ترتیب هر کدام به مدت 2 دقیقه
11- خشک کردن کامل لام در دمای محیط 12- افزودن محلول C به اندازه (3-2 قطره) و بلافاصله محلول D به اندازه (3-2 قطره)، تکان دادن آهسته لام جهت مخلوط شدن دو محلول و نگهداری به مدت 15 دقیقه
13- شستشوی لام با جریان آهسته PBS
14- خشک کردن لام و مشاهده با میکروسکوپ نوری با درشت نمایی 1000x
15- شمارش حداقل 400 اسپرم و محاسبه DFI
تفسیر نتایج:
اسپرم سالم بدون شکست DNA
1- اسپرم دارای هاله بزرگ (Large halo): هاله ای که عرض آن مشابه و یا بزرگتر از قطر هسته می باشد (b).
2- اسپرم دارای هاله متوسط (Medium halo): هاله ای که عرض آن بین هاله بزرگ و کوچک است (c).
اسپرم دچار شکست DNA
1- اسپرم دارای هاله کوچک (Small halo): هاله ای که عرض آن کوچک تر و یا برابر یک سوم قطر هسته می باشد (d).
2- اسپرم فاقد هاله (No halo) (e).
3- اسپرم فاقد هاله با هسته تخریب شده، نامنظم و با رنگ پذیری ضعیف (Degraded) (f).
هشدارها
1- از تماس محتویات کیت با پوست و چشم و نیز استنشاق آنها اکیدا خودداری شود.
2- در زمان آزمون از دستکش و ماسک استفاده گردد.
3- محل انجام آزمون دارای تهویه هوای مناسب باشد.
4- دفع پسماندها با رعایت اصول ایمنی آزمایشگاه صورت گیرد.
5- از خوردن و آشامیدن در حین آزمون اکیدا خودداری شود.